產品名稱:PRECEDO胃癌3D類器官培養基(Gastric Carcinoma Organoid Medium)
產品說明:PRECEDO胃癌3D類器官培養基(Gastric Carcinoma Organoid Medium)是一種為促進人源胃癌類器官體外形成和擴增而開發的培養基。它是一種無菌的液體混合系統,含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機和無機化合物、生長因子、微量礦物質等。該培養基的*配方可以提供一個理想人源胃癌類器官體外培養環境,選擇性地促進體外人源胃癌類器官的生長。
產品優勢:
(1) 培養成功率高
(2) 體外持續擴增
(3) 保持腫瘤特征
(4) 藥敏結果與臨床數據接近
使用說明:
?實驗前準備
(1)15mL無菌離心管、1.5mL離心管、24孔細胞培養板、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入生物安全柜中紫外照射30min。
(2)提前30min從4℃冰箱取出胃癌類器官培養基平衡至室溫,提前1h從-20℃冰箱取出所需體積的基質膠冰上融化。
?胃癌類器官培養
(1)將獲取的胃癌原代細胞懸液計數,根據計算好的體積吸取細胞懸液加入預冷的1.5 mL離心管中。
(2)補齊預冷的培養基至所需體積,將預冷后的細胞懸液加入等體積的基質膠中輕輕混勻(全程冰上操作),使得胃癌原代細胞終濃度為5×106個細胞/毫升。
(3)然后將細胞與基質膠的混合液按照50μL/孔呈半球形點膠于24孔板。
(4)將培養板放入5%CO2 37 ℃培養箱中30min,待基質膠*凝固。
(5)沿孔壁每孔緩慢加入500μL預先恢復至室溫的類器官培養基,置5%CO2 37℃培養箱培養。
(6)3天后鏡下觀察類器官形成情況,粒徑大于30~50μm即認為類器官已經形成,每3天更換一次培養基進行培養,持續觀察類器官大小,鏡下觀察大部分類器官大小均大于30~50μm且大小不再增大即可收集類器官進行后續實驗。
?胃癌類器官收集
(1)棄培養基,每孔加入200μL基質膠解離試劑,室溫放置1min。
(2)輕輕吹打混勻,收集至15mL離心管中,50rpm恒溫震蕩解離10-20min,解離之后1500rpm離心3 min,輕輕吸去上清,待用。
?胃癌類器官傳代
(1)收集的類器官,加入適量的消化酶,37℃,200rpm消化(具體時間根據類器官大小和數量決定,以肉眼可見顆粒明顯減小一半為準,可中間取消化的類器官顯微鏡觀察,類器官消化至3~10個細胞集合體理想)。
(2)消化*后1500rpm離心3min,棄上清,使用清洗液重懸后1500rpm離心3min。
(3)加入預冷的胃癌類器官培養基進行重懸,計數,按照培養步驟操作繼續培養。
注意事項:
1.本產品在使用前需平衡至室溫。
2.樣本需為腫瘤組織,且腫瘤細胞比例越高(>50%),類器官培養成功率越高;
3.使用產品時應注意無菌操作,避免污染。
4.為保持本產品的愚佳使用效果,不宣將其過夜放置于室溫或較高的溫度環境中。5.類器官培養過程要輕柔,避免基質膠凝固后散膠。
6.請于保質期內使用本產品,超出保質期,必須放棄使用。
7.本產品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。