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產(chǎn)品名稱:原代胃癌條件重編程培養(yǎng)基(Human Gastric Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)
產(chǎn)品說明:原代胃癌條件重編程培養(yǎng)基(Human Esophagus Carcinoma Conditional Reprogramming Medium)是一種為促進(jìn)人源胃癌原代細(xì)胞體外生長而設(shè)計的培養(yǎng)基。它是一種無菌的液體混合系統(tǒng),含有必需和非必需的氨基酸、維生素、有機(jī)和無機(jī)化合物、激素、生長因子、微量礦物質(zhì)等。該培養(yǎng)基產(chǎn)品基于碳酸氫鹽的緩沖體系,在5%CO2/95%空氣的培養(yǎng)箱中平衡時,pH值為7.4。該培養(yǎng)基的配方可以提供一個理想平衡的營養(yǎng)環(huán)境,選擇性地促進(jìn)體外人源胃癌原代細(xì)胞的生長。
產(chǎn)品優(yōu)勢:
(1) 培養(yǎng)成功率高
(2) 體外持續(xù)擴(kuò)增
(3) 保持腫瘤原始病理特征
(4) 藥敏結(jié)果宇臨床數(shù)據(jù)接近
使用說明
?使用前準(zhǔn)備
(1)y射線照射過的NIH-3T3細(xì)胞(40Gy輻照)。
(2)15mL無菌離心管、移液器、移液管、無菌槍頭等表面消毒后放入超凈工作臺中紫外照射30min。提前30min從4℃冰箱取出原代細(xì)胞培養(yǎng)基平衡至室溫。
?胃癌原代細(xì)胞培養(yǎng)
(1)初次分離的胃癌小樣本細(xì)胞懸液一般無需計數(shù),直接種入12孔板中。
(2)胃癌術(shù)中樣本過70微米篩網(wǎng)后計數(shù),按照表1中細(xì)胞數(shù)接種在合適的培養(yǎng)器皿中,加入y射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞(添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1和表2所示)。
(3)原代細(xì)胞初次接種后2-3天勿動(利于細(xì)胞貼壁),培養(yǎng)過程中若培養(yǎng)基顏色變黃但細(xì)胞未長滿時可換半液,鏡下觀察細(xì)胞未長滿但3T3細(xì)胞已不足時,適量補(bǔ)充γ射線輻照后的3T3細(xì)胞(一般補(bǔ)加初始數(shù)目的一半)。
注∶針對實(shí)體瘤樣本,細(xì)胞粒徑大于10微米進(jìn)行計數(shù);倍增時間>48小時則定義為增殖較慢的細(xì)胞;對于增殖較快細(xì)胞,可以綜合倍增時間、接種器皿的規(guī)格以及培養(yǎng)周期來估算接種的細(xì)胞數(shù)量;表格供參考,具體實(shí)驗(yàn)具體對待。
?胃癌原代細(xì)胞傳代
(1) 鏡下觀察細(xì)胞形成克隆,且匯合度達(dá)到80~90%時即可傳代。
(2) 培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞,棄舊培養(yǎng)液,0.25%胰mei洗滌30秒后吸盡,再加入適量0.05%胰酶,37℃孵育,5 min后拿出輕拍培養(yǎng)瓶/板側(cè)面,顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況。
(3) 細(xì)胞消化至細(xì)胞變圓并開始脫落時用終止培養(yǎng)基終止消化,并將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至離心管中,1500rpm離心3 min。
(4) 棄上清,以1-2mL相對應(yīng)的原代細(xì)胞培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,活細(xì)胞計數(shù),將細(xì)胞懸液按適合的細(xì)胞密度接種于培養(yǎng)瓶/板,加入y射線輻照后的NIH-3T3細(xì)胞(不同規(guī)格培養(yǎng)瓶/板底面積、接種原代細(xì)胞數(shù)量、添加滋養(yǎng)細(xì)胞數(shù)量如表1或表2所示)。
(5) 補(bǔ)加原代細(xì)胞培養(yǎng)基至所需體積,輕輕搖晃混勻,表面消毒后置培養(yǎng)箱,37℃、5%CO2條件培養(yǎng)。
注意事項:
1.本產(chǎn)品在使用前需平衡至室溫。
2.本產(chǎn)品中含有胎牛血清和原代細(xì)胞專用抗生素,如無特別需要不用額外再添加血清和雙抗,可直接使用。
3.為保持本產(chǎn)品的理想使用效果,不宜將其過夜放置于室溫或較高的溫度環(huán)境中。
4.請于保質(zhì)期內(nèi)使用本產(chǎn)品,超出保質(zhì)期,必須放棄使用。
5.原代細(xì)胞初次接種時會貼壁較慢和貼壁不牢,若無必要,盡量減少取出觀察的次數(shù),建議2-3天一次。
6.傳代消化時切記不要消化過度,對細(xì)胞造成損傷,影響細(xì)胞狀態(tài)。
7.接種細(xì)胞時注意細(xì)胞密度,不可過稀或過密。
8.樣本需為胃癌術(shù)中或內(nèi)鏡樣本,且腫瘤細(xì)胞比例越高(至少>50%),培養(yǎng)成功率越高,不推薦用于少量樣本(如循環(huán)腫瘤細(xì)胞)的培養(yǎng)。
9.使用產(chǎn)品時應(yīng)注意無菌操作,避免污染。
10.本產(chǎn)品僅用于科研用途,不能用于體外診斷。