Alzet滲透泵的基本操作指南
一、Alzet滲透泵型號選擇
Alzet滲透泵提供了100ul、200ul和2ml三種不同的藥物容量規(guī)格,持續(xù)時間從3天到6周不等。實驗時應根據(jù)具體需求選擇合適的型號。其中,100ul和200ul的適合成年小鼠使用,而2ml的由于容積較大,更適合大鼠或其他體型較大的動物。
二、Alzet滲透泵濃度計算
藥物濃度的調(diào)配需根據(jù)每日用藥量和緩釋泵的輸送速率兩項參數(shù)來計算,每日用藥量可通過查閱專業(yè)文獻獲取。此外,每支緩釋泵的輸送速率信息會附在包裝盒上,應根據(jù)包裝上的速率進行配藥。
濃度計算舉例:
Eg:2001滲透泵,給藥:抗利尿激素(ADH),
1.查閱文獻發(fā)現(xiàn),大鼠正常的ADH分泌量為30ng/天/只,或1.25ng/小時/只。然后,計算出完成1.25ng/小時所需輸注量所需的ADH濃度:
ko=Q•Cd
其中ko(µg/hr)是質(zhì)量輸送速率,Cd(µg/µl)表示藥物溶液濃度,Q(µl/hr)表示泵的泵送速率。
2.2001型泵的(標稱)泵送速率為1µl/hr(Q),因此所需濃度(Cd)為:
Cd=1.25 ng/hr/1µl/hr=1.25 ng/µl
=1.25 x 10-3µg/µl
3.2001型泵儲液體積(標稱)為200µl。為了達到所需的1.25 x 10-3µg/µl濃度,應在200µl中溶解的ADH量為:
m=c•v
(1.25 x 10-3µg/µl)x 200µl=0.25µg
綜上,為了模擬大鼠正常的ADH分泌量30 ng/天/只(或1.25 ng/小時/只),必須在溶液中配制濃度為1.25 x 10-3µg/µl的ADH溶液。應配制過量溶液,以保證泵填充期間的安全裕度。
注意事項:
1、不能根據(jù)Alzet滲透泵自身體積來計算配藥濃度,Alzet滲透泵實際載藥體積會稍大于宣稱體積;
2、泵體埋入動物體內(nèi)后應在釋放周期結(jié)束時取出,不能一直留在動物體內(nèi)。
三、Alzet滲透泵藥液灌充
1、將Alzet滲透泵垂直握在手中,從頂部的孔處插入充液針,直至針尖輕輕接觸到緩慢釋放泵底部,然后略微向上提起充液針約1mm。
2、輕柔地推動注射器,將藥液注入緩慢釋放泵(緩慢釋放泵應始終保持垂直)。當在緩慢釋放泵的孔處看到藥液溢出時,請停止注射,輕輕拔出充液針。
3、將流量調(diào)節(jié)器完q插入泵體,完成注射,隨后進行培育或植入手術(shù)。
4、若泵體內(nèi)出現(xiàn)氣泡,可將流量調(diào)節(jié)器拔出并重新進行注射。
注意事項:
1、泵內(nèi)藥物液體需充盈,泵內(nèi)不應有空氣存在,否則可能導致泵送速度不穩(wěn)定。
2、灌輸速度宜適中,以免產(chǎn)生氣泡,避免采用容積過大的注射器進行填充。
四、Alzet滲透泵泵體孵育
在Alzet滲透泵啟動階段,可能會出現(xiàn)泵送速率不穩(wěn)定的情況。為了調(diào)節(jié)泵送速率,建議在植入前進行預處理。
1、準備50ml離心管,倒入適量的0.9%生理鹽水。
2、將已灌裝藥液的Alzet滲透泵放入離心管中,然后將離心管放入37℃恒溫箱中進行一定時間的培養(yǎng)(具體時間根據(jù)不同型號的Alzet滲透泵而異)。
注意:在培養(yǎng)過程中,確保生理鹽水完q覆蓋泵體。
五、Alzet滲透泵植入手術(shù)
Alzet滲透泵可在背部皮下或腹腔植入進行全身性給藥;此外也可連接導管將藥物引導到特定部位進行給藥。
六、Alzet滲透泵皮下植入
1、使動物陷入麻醉狀態(tài),令其躺臥。
2、在肩胛骨之間的皮層上開啟一個裂口。
3、利用止血夾分離皮下結(jié)締組織,形成一處間隙。
4、將漸進泵植入其中,確保流量調(diào)節(jié)器不朝向切口。
5、利用傷口鉗或縫合線縫合皮層切口。
七、Alzet滲透泵腹腔植入
1、麻醉動物,使動物處于仰臥姿態(tài)。
2、在動物的胸廓下腹中線的皮膚上用刀劃開口。
3、鑷子挑起腹肌,避免傷及內(nèi)臟,然后用剪刀向下剪開腹肌。
4、將緩釋泵植入切口,流量調(diào)節(jié)器不能朝向切口。
5、用縫線縫合肌肉切口,皮膚切口可以使用傷口夾或縫線縫合。
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