天根細菌基因組dna提取試劑盒簡介:
本試劑盒采用可以高效、專一結合 DNA 的離心吸附柱和dute的緩沖液系統,既適用于革蘭氏陰性菌基因組 DNA 的提取,也可適用于革蘭氏陽性菌基因組 DNA 的提取。本試劑盒也可用于食品致病菌(微生物)基因組提取,如:金黃色葡萄球菌、霍亂弧菌、出血性大腸桿菌 O157:H7、單增李斯特、沙門氏菌、阪崎腸肝菌等。可從1-5 ml細菌培養液中,快速提取純化10-40μg純凈的基因組 DNA,所得基因組 DNA 可直接用作 PCR 模板、酶切、雜交等分子生物學實驗。
天根細菌基因組dna提取試劑盒特點:
★ 簡單快速:革蘭氏陰性菌在1h內可獲得高純的基因組DNA。
★ 純度高:獲得的DNA純度高,可直接用于PCR、酶切、雜交等分子生物學實驗。
天根細菌基因組dna提取試劑盒下游應用:
★ 革蘭氏陰性菌基因組提取
★ 革蘭氏陽性菌基因組提取
★ 食品中致病菌基因組提取
天根細菌基因組dna提取試劑盒操作步驟:
1.取細菌培養液1-5 ml,10,000 rpm(~11,500×g)離心1min,盡量吸凈上清。
2.向菌體沉淀中加入200μl緩沖液GA,振蕩至菌體chedi懸浮。
注意:對于較難破壁的革蘭氏陽性菌,可略過第2步驟,加入溶菌酶溶液進行破壁處理,具體方法為:加入110μl緩沖液(20 mM Tris,pH 8.0; 2 mM Na?-EDTA;1.2%Triton),和70μl溶菌酶溶液(50 mg/ml,貨號:RT401),37 ℃處理30min以上。如果需要去除RNA,可加入4μl RNase A(100 mg/ml)溶液(貨號:RT405-12),振蕩15 sec,室溫放置5 min。
3.向管中加入20μl Proteinase K溶液,混勻。
4.加入220μl緩沖液GB,振蕩15 sec,70 ℃放置10 min,溶液應變清亮,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
注意:加入緩沖液GB時可能會產生白色沉淀,一般70℃放置時會消失,不會影響后續實驗。如溶液未變清亮,說明細胞裂解不chedi,可能導致提取DNA量少和提取出的DNA不純。
5.加220μl無水乙醇,充分振蕩混勻15 sec,此時可能會出現絮狀沉淀,簡短離心以去除管蓋內壁的水珠。
6.將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中),12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec,倒掉廢液,將吸附柱CB3放入收集管中。
7.向吸附柱CB3中加入500μl緩沖液GD(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 pm(~13,400×g)離心30 sec,倒掉廢液,將吸附柱CB3放入收集管中。
8.向吸附柱CB3中加入600μl漂洗液PW(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),12,000 rpm(~13,400×g)離心30 sec,倒掉廢液,吸附柱CB3放入收集管中。
9.重復操作步驟8。
10.將吸附柱CB3放回收集管中,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,倒掉廢液。將吸附柱CB3置于室溫放置數分鐘,以chedi晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除,漂洗液中乙醇的殘留會影響后續的酶反應(酶切、PCR等)實驗。
11.將吸附柱CB3轉入一個干凈的離心管中,向吸附膜的中間部位懸空滴加50-200μl洗脫緩沖液TE,室溫放置2-5 min,12,000 rpm(~13,400×g)離心2 min,將溶液收集到離心管中。
注意:洗脫緩沖液體積不應少于50 μl,體積過小影響回收效率。洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大影響。若用ddH?O做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5范圍內,pH值低于7.0會降低洗脫效率;且DNA產物應保存在-20℃,以防DNA降解。為增加基因組DNA的得率,可將離心得到的溶液再加入吸附柱CB3中,室溫放置2 min,12,000rpm(~13,400×g )離心2 min。
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